Kaj je čitalnik mikroplošč ELISA?
Čitalnik mikroploščic, torej encimsko vezan imunski test, je poseben instrument za encimsko vezan imunski test. Pravzaprav gre za poseben fotoelektrični kolorimeter ali spektrofotometer v preobleki, njegovo osnovno načelo delovanja pa je v bistvu enako kot glavna struktura in fotoelektrični kolorimeter. Lahko ga preprosto razdelimo v dve kategoriji, polavtomatsko in popolnoma avtomatsko, vendar so njuna načela delovanja v bistvu enaka. Njegovo jedro je kolorimeter, torej kolorimetrična metoda se uporablja za analizo vsebnosti antigena ali protitelesa. Določitev ELISA običajno zahteva, da je končni volumen preskusne raztopine manjši od 250 μL, in testa ni mogoče zaključiti s splošnim fotoelektričnim kolorimetrom, zato obstajajo posebne zahteve za fotoelektrični kolorimeter v čitalniku mikroplošč.
Načelo
Čitalnik mikroploščic je pravzaprav fotoelektrični kolorimeter ali spektrofotometer v preobleki posebnega namena, njegovo osnovno načelo delovanja pa je v bistvu enako kot glavna struktura in fotoelektrični kolorimeter. Na sliki je prikazano delo enokanalnega čitalnika mikroplošč z avtomatskim vzorčenjem. Shematski diagram. Svetlobni val, ki ga oddaja žarnica svetlobnega vira, se s filtrom ali monokromatorjem pretvori v monokromatsko svetlobo in vstopi v preskušani vzorec v plastični mikroporozni drog. Del monokromatske svetlobe absorbira vzorec, drugi del pa se prenese skozi vzorec, osvetljen na fotodetektor, fotodetektor pretvori različne svetlobne signale preskušanca v ustrezne električne signale. Električni signali se obdelujejo s predojačenjem, logaritemskim ojačanjem in analogno-digitalno pretvorbo. Vstopite v mikroprocesor za obdelavo in izračun podatkov ter na koncu prikažite rezultate na zaslonu in tiskalniku. Mikroprocesor nadzoruje tudi gibanje mehanskega pogonskega mehanizma v smeri X in Y, da premakne mikroploščico skozi krmilno vezje, da se izvede postopek samodejnega zaznavanja vzorčenja. Drugi čitalniki mikroploščic za detekcijo uporabljajo ročno premikanje mikroploščice, zato sta mehanski pogonski mehanizem in krmilno vezje v smeri X in Y izpuščena, tako da je instrument manjši in struktura enostavnejša.
Mikroplošča je prozorna plastična plošča, ki se uporablja posebej za namestitev vzorca za testiranje. Plošča ima več vrst majhnih lukenj enake velikosti, v luknjo pa je vgrajen ustrezen antigen ali protitelo. Vsaka majhna luknja lahko vsebuje nekaj deset mililitrov raztopine.
Svetloba je elektromagnetno valovanje. Valovna dolžina 100nm-400nm se imenuje ultravijolična svetloba, svetlobo med 400nm in 780nm lahko opazi človeško oko, valovno dolžino, večjo od 780nm, pa imenujemo infrardeča svetloba. Ljudje lahko vidijo barve samo zato, ker svetloba zadene predmet in se od predmeta odbije nazaj. Zelene rastline so zelene, ker večina rastlin absorbira rdeče-oranžno svetlobo in modro-vijolično svetlobo, ne absorbirajo in ne odbijajo zelene, zato so rastline videti zelene. Načelo merjenja čitalnika mikroploščic je zaznavanje absorbance analita pri določeni valovni dolžini.
Struktura
Obstajajo plošče s 40 vdolbinicami, plošče s 55 vdolbinicami, plošče s 96 vdolbinicami itd. Različni instrumenti uporabljajo različne plošče z odprtinami, ki jih je mogoče testirati eno za drugo ali vrsto za vrstico.
Monokromatsko svetlobo, ki jo uporablja čitalnik mikroploščic, lahko pridobimo bodisi s koherentnim filtrom bodisi z istim monokromatorjem kot spektrofotometer. Pri uporabi filtra kot filtrirne naprave je enak običajnemu kolorimetru. Lahko se postavi pred mikroploščico ali za mikroploščico. Po kondenzatorju membrana doseže reflektor, ga odbije reflektor pod kotom 90° in preide skozi kolorimetrično raztopino navpično, nato pa se pošlje skozi filter. Na fotocelico.
Iz delovnega blok diagrama in diagrama svetlobne poti čitalnika mikroploščic je razvidno, da ima naslednje razlike od navadnih fotoelektričnih kolorimetri:
(L) Posoda za kolorimetrično raztopino, ki jo je treba testirati, ne uporablja več kivete, temveč plastično mikroploščico. Mikroplošča je običajno izdelana iz prozornega polietilenskega materiala, ki ima močan adsorpcijski učinek na antigen in protitelesa, zato se uporablja. Deluje kot nosilec trdne faze.
⑵Ker je plastična mikroplošča, ki vsebuje vzorec, večvrstna porozna, lahko svetloba prehaja samo navpično, tako da svetlobni žarek čitalnika mikroploščic prehaja skozi raztopino, ki jo je treba testirati, in mikroploščico navpično. Svetlobni žarek je lahko od zgoraj navzdol ali pa lahko prehaja skozi kolorimetrično tekočino od spodaj navzgor.
⑶ Čitalniki mikroplošč običajno ne uporabljajo samo A, ampak včasih uporabljajo tudi optično gostoto OD za izražanje absorbance. Čitalnike mikroploščic lahko razdelimo na dve vrsti: enokanalne in večkanalne, enokanalne pa na dve vrsti: avtomatske in ročne. Avtomatski tip instrumenta Obstaja mehanski pogonski mehanizem v smeri X in Y, ki lahko pošlje majhne luknje mikroploščice L eno za drugo pod žarek za testiranje, ročni tip pa za merjenje uporablja ročno premikanje mikroploščice.
Na podlagi enokanalnega čitalnika mikroploščic je bil razvit večkanalni čitalnik mikroplošč. Ta vrsta čitalnika mikroploščic je na splošno avtomatizirana. Nima več žarkov in več fotodetektorjev, kot je 12-kanalni instrument z 12 žarki ali 12 svetlobnimi viri, 12 detektorji in 12 ojačevalniki, pod delovanjem mehanske pogonske naprave v smeri X se zazna 12 vzorcev v vrstico. Hitrost zaznavanja večkanalnega čitalnika mikroploščic je hitra, vendar je njegova struktura višje tudi bolj zapletene cene.
Obseg uporabe čitalnika mikroploščic
Hematološki test Test protiteles, povezanih s trombociti, PAIgA, PAIgG, PAIgM
Določanje D-dimera D-dimera
Določanje produktov razgradnje fibrina v serumu FDP
Določanje T3, T4 s trijodotironinom in tetrajodotironinom
Imunološki test Določanje C-reaktivnega proteina CRP
Določanje imunoglobulinov IgD, IgE
Določanje krožečih imunskih kompleksov CIC
Določanje revmatoidnega faktorja IgG, IgA, IgM RF
Protitelesa proti tiroglobulinu, določanje mikrosomskih protiteles TG, TM
Imunološko odkrivanje tumorskega raka Določanje alfa-fetoproteina AFP
Določanje karcinoembrionalnega antigena CEA
Določanje prostate specifičnega antigena PSA
Določanje raka trebušne slinavke, raka žolčevodov, raka želodca CA19-9
Določanje raka jajčnikov CA125
Določanje raka dojke CA15-3
Določanje ploščatoceličnega karcinoma materničnega vratu SCC
Odkrivanje večkratnega raka kostnega mozga
Določanje raka ščitnice hTG
Imunološki test za nalezljive bolezni, serološki test za hepatitis A, anti-HAV-IgM
Serološki test za hepatitis B Dva para in pol
Serološko odkrivanje hepatitisa C Anti-HAV-IgG, anti-HCV-IgM
Serološko odkrivanje hepatitisa D Anti-HDV-IgG, anti-HDV-IgM
Serološko odkrivanje hepatitisa E Anti-HEV-IgG
Odkrivanje protiteles proti hemoragični mrzlici z ledvičnim sindromom HFRS-IgG
Odkrivanje protiteles IgM proti virusu japonskega encefalitisa
Odkrivanje protiteles proti virusu humane imunske pomanjkljivosti (tj. regionalni AIDS) HIV β 2 M
Prenatalni in postnatalni test delovanja nege Test na virus toksoplazme TOXO
Odkrivanje virusa rdečk RV
Odkrivanje citomegalovirusa CMV
Odkrivanje virusa herpes simpleksa Anti-HSV (Ⅰ, Ⅱ)
Drugi lahko opravijo tudi genetsko testiranje in ostanke živali, predmete za pregled ostankov pesticidov itd.
